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血清脂蛋白的离心分离方法
发布时间:2012-07-23浏览:2199次

        利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种型号各种容量的固定角式转头。

(一)梯度液

 
A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1
ml 1N NaOH,混匀至全部溶解。加重蒸水至1000mlzui后再加3ml重蒸水(Nacl:0.195mol)。终密度1.006g/cm3,PH10.37。
B液:加24.98g NaBr 到100ml A液中。终密度1.182g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH9.72。
C液:加78.32g NaBr 到100ml A液中。终密度1.478g/cm3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH8.86。
(二)离心机及转头
• 离心机:Hitachi CP-MX系列超速离心机或其他类似机组。
Hitachi CS-150GXL微量超速离心机。
• 转头,离心管;S 140 AT:140,000rpm,1,050,000×g,10×2ml,K=5,1PC厚壁管。
S 80 AT3:80,000rpm,415,000×g,8×8ml,K=23,6PC厚壁管。
S 70 AT:70,000rpm,505,000×g,8×40ml,K=44,40PA管。
(三)血浆-血球分离:
全血,角转头或甩平转头3000rpm×20min,沉淀为血细胞,上清血浆待用。
(四)乳糜粒分离
离心参数:各种转头均可用,4×106(g×min),10℃
梯度液:离心管下部3/4容积为血浆,上部1/4容积为0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。
离心结果:乳糜粒上浮,离心管倾斜,吸管贴管壁慢吸出(约占血浆容积的2~6%。禁令12小时以上供血者血浆中乳糜含量很低,食后供血者含量较高。
(五)血清脂蛋白分离
VLDL分离(ρ<1.006g/cm3
转头
离心管内液体分布
离心参数
结果
S140AT
(CS-150GXL机组)
下部600μl血浆
上部300μl A液
140,000rpm×50min
16℃
加速:5
减速:7
可见明显分层上部约1/3VLDL吸出
S80AT3
(CS-150GXL机组)
下部3.4ml血浆
上部1.7mlA液
80,000rpm×4.5hrs
16℃
加速:5
减速:7
同上
P70AT
(CP-MX机组)
下部24ml血浆
上部11.7ml A液
70,000rpm×8hrs
16℃
加速:5
减速:7
同上
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
LDL(含IDL)分离(1.006g/cm3<ρ<1.063g/cm3
 
转头
离心管内液体分布
离心参数
结果
S140AT
(CS-150GXL机组)
*次离心后上部VLDL取出,下部600μl移入另一离心管,加入300μl B液,充分混合
140,000rpm×80min
16℃
加速:9 减速:7
上部1/3体积LDL+IDL吸出
S80AT3
(CS-150GXL)
*次离心后上部VLDL吸出,,下部3.4ml移入另一离心管,加入1.7ml B液并充分混合
80,000rpm×5.5hrs
16℃
加速:9减速:7
上部1/3体积LDL+IDL吸出
P70AT
(CP-MX系列超速机或类似机型)
*次离心后上部11.7ml吸出,下部约24ml 移入另一离心管,加入11.7ml B液,充分混合
70,000rpm×10hrs
16℃
加速:9 减速:6
上部1/3体积LDL+IDL吸出
 
HDL分离(1.063g/cm3<ρ<1.21g/cm3
 
转头
离心管内液体分布
离心参数
结果
S140AT
(CS-150GXL机组)
第二次离心后吸出上部300μl后,下部600μl移入另一离心管,加入300μl C液,充分混合
140,000rpm×140min
16℃
加速:9
减速:7
可见较明显分层,
上部为HDL,下部为血清白蛋白及球蛋白
S80AT3
(CS-150GXL机组)
第二次离心后吸出上部约1.7ml、下部3.4ml移入另一离心管,加入1.7ml C液,充分混合
80,000rpm×8小时
16℃
加速:9
减速:7
可见较明显分层,
上部为HDL,下部为血清白蛋白及球蛋白
P70AT
(CP-MX系列机或其他类型机组)
第二次离心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一离心管,加入约12ml C液,充分混合
70,000rpm×15小时
16℃
加速:9
减速:6
可见较明显分层,
上部为HDL,下部为血清白蛋白及球蛋白
 
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